Les chimistes utilisent fréquemment un instrument connu comme un ultraviolet-visible, ou spectromètre UV-Vis, pour mesurer la quantité de rayonnement ultraviolet et visible absorbée par des composés. La quantité de rayonnement ultraviolet ou visible absorbée par un composé dépend de trois facteurs: la concentration, C, de la sample- la longueur du trajet, l, du porte-échantillon, qui détermine la distance sur laquelle l'échantillon et le rayonnement interact- et coefficient d'absorption molaire, e, parfois appelé le coefficient d'extinction molaire. L'équation est exprimée en A = ecl et est connu comme la loi de Beer. L'équation contient donc quatre variables, et de déterminer l'une des quatre personnes a besoin des valeurs connues pour trois.
Déterminer l'absorbance pour le composé à la longueur d'onde souhaitée. Cette information peut être extraite du spectre d'absorption produite par un instrument de type UV-Vis. Les spectres sont tracés en normalement par rapport à la longueur d'onde d'absorbance en nanomètres. En général, l'apparition de toute "pics" dans le spectre des longueurs d'onde indique les d'intérêt.
Calculer la concentration de l'échantillon en moles par litre, mol / L, également connu sous le molarité, M. L'équation générale pour la molarité est
M = (grammes d'échantillon) / (poids moléculaire du composé) / litres de solution.
Par exemple, un échantillon contenant 0,10 grammes de tetraphenylcyclopentadienone, avec un poids moléculaire de 384 grammes par mole, dissous dans du methanol et on le dilue à un volume final de 1,00 litres présenterait une molarité de:
M = (0,10 g) / (384 g / mol) / (1,00 L) = 0,00026 mol / L.
Déterminer la longueur du trajet à travers le porte-échantillon. Dans la plupart des cas, cela est de 1,0 cm. Autres longueurs de parcours sont possibles, en particulier lorsqu'ils traitent avec des supports d'échantillons destinés à des échantillons gazeux. De nombreux spectroscopistes comprennent la longueur du trajet avec les informations sur l'échantillon imprimé le spectre d'absorbance.
Calculer le coefficient d'absorption molaire selon l'équation A = ecl, où A est l'absorbance, c est la concentration en moles par litre et L est la longueur du trajet en centimètres. Résolu pour e, cette équation devient e = A / (cl). Reprenons l'exemple de l'étape 2, tetraphenylcyclopentadienone présente deux maxima dans son spectre d'absorption: 343 nm et 512 nm. Si la longueur du trajet est de 1,0 cm et l'absorbance à 343 était de 0,89, alors
e (343) = A / (cl) = 0,89 / (0.00026 * 1,0) = 3423
Et pour l'absorbance de 0,35 à 512 nm,
e (512) = 0,35 / (0.00026 * 1,0) = 1346.