Comment calculer résolutions HPLC

Instructions

1. Mesurer les largeurs des deux pics adjacents dans le chromatogramme en notant où les valeurs de l'axe x sont à la base de chaque pic. L'axe des abscisses représente le temps de rétention, habituellement mesuré en secondes. Ainsi, si un pic à 15.1 secondes commence et se termine à 18,5 secondes, sa largeur est de (18,5 à 15,1) = 3,4 secondes.

2. 
   
   
   

   Déterminer les temps de rétention en notant le temps, à savoir, l'emplacement sur l'axe des x, qui correspond aux positions des maxima des pics. Cette valeur sera normalement à mi-chemin entre les deux valeurs utilisées pour calculer la largeur à l'étape 1. L'exemple donné dans l'étape 1, par exemple, pourrait présenter un maximum à environ 16,8 secondes.

3. Calculer la résolution, R, entre deux pics par

   
   
   
   
   

   R = (RT1 - RT2) / [0.5 * (W1 + W2)],

   RT1 RT2 où et représentent les temps de rétention des pics 1 et 2, et W1 et W2 représentent les largeurs des pics prises sur leurs bases. En reprenant l'exemple des étapes 2 et 3, une pointe présente un temps de rétention de 16,8 secondes et une largeur de 3,4 secondes. Si le second pic a présenté un temps de rétention de 21,4 secondes, avec une largeur de 3,6 seconde, puis la résolution serait

   R = (21,4 à 16,8) / [0.5 * (3.4 + 3.6)] = 4,6 / 3,5 = 1,3.