La préparation d'un cocktail d'inhibiteurs de protease

Inhibiteurs de la protéase

1. Assurez-aprotinine, leupeptine et pepstatine chez Stock concentraions de 100uM (micromolaires).

   L'aprotinine est disponible sous forme de solution à une concentration du stock de 100 mM.

   
   
   
   

   Pour faire 1 ml (millilitres) de 100uM, dissoudre 1UL (microlitre) dans 999ul de PBS 1X (Physiological Solution tampon).

   Leupeptine est disponible sous forme de poudre. Poids moléculaire de Leupeptine est 475.6. Dissoudre 100 ug (microgrammes) de poudre dans 2 ml d'eau pour faire la concentration du stock de 100uM.

   
   
   
   
   

   Pour faire Pepstatine, dissoudre 100 ug de poudre pepstatine dans 1,45 ml d'eau pour obtenir une concentration de l'action de 100uM.

   Tous ces éléments peuvent être soit mélangés entre eux ou stockées individuellement à moins 80 degrés Celsius.

2. Assurez PMSF (fluorure de phénylméthyl sulfonyle) chez Stock 100 mM. PMSF vient sous la forme de poudre. Le poids moléculaire est de 174,19 PMSF. Dissoudre 10 mg de PMSF dans 572 ul de 100 pour cent d'éthanol et stocker à 4 degrés Celsius. Il est sensible à la lumière et doit être stocké dans l'obscurité.

   Ceci est ajouté au tampon de lyse juste avant utilisation.

3. Mélanger les proteases ensemble aux concentrations nécessaires. En général, ils sont dilués d'un facteur 100 pour l'utilisation.

• Cocktails disponibles dans le commerce des inhibiteurs de la protéase gagner du temps et sont faciles à utiliser. Ils viennent sous la forme de comprimés ou de solutions.